Názov štúdie: Molekulárne mechanizmy pôsobenia preparátov Reconvel® na nádorové bunky
Výsledky testovania preparátov:
Testovanie IR a LF sa v prvej fáze realizovalo na špecifických bunkách rakoviny prsníka (v bunkovej línii duktálneho adenokarcinómu prsníka). V tejto súvislosti dávame do pozornosti exaktné výsledky prvej fázy nášho testovania:
Imuno Recover (IR) and Life Force (LF) aplikované samostatne vykazujú cytotoxické účinky, ktoré sú značne špecifické pre nádorové bunky
Na začiatku sme testovali, či IR a LF vykazujú cytotoxické účinky. Zistili sme, že IR aj LF skutočne vykazujú takéto účinky v bunkovej línii duktálneho adenokarcinómu prsníka (obr. 1A). IR a LF vykazujú cytotoxické účinky aj v prsníkových epitelových bunkách, hoci výrazne nižšie (obr. 1B). Z uvedeného vyplýva, že cytotoxické účinky IR a LF sú vysoko špecifické pre rakovinové bunky, čo vytvára možnosť nájsť a využiť terapeutické okno pre aplikáciu IR a LF v liečbe rakoviny, ktoré by na jednej strane zabezpečilo účinné zabíjanie rakovinových buniek, zatiaľ čo normálne bunky by nechávalo nedotknuté.
Obrázok 1: Cytotoxické účinky rôznych riedení IR a LF v bunkách duktálneho adenokarcimómu prsníka (A) a epitelových bunkách prsníka (B).
IR and LF aplikované súčasne vykazujú cytotoxické účinky, ktoré sú značne špecifické pre nádorové bunky
Následne sme zmiešali IR s LF v pomere 1:1, čo nám umožnilo študovať cytotoxické účinky ich súčasného podávania. Súčasné podanie IR a LF vykazovalo cytotoxický účinok v bunkovej línii duktálneho adenokarcinómu prsníka (obr. 2A). Zmes IR/LF vykazovala cytotoxické účinky aj v epitelových bunkách prsníka, ale opäť výrazne nižšie (podobne ako tomu bolo v prípade samostatného podávania IR a LF) (obr. 2B). Podobne ako pri ich samostatnom podávaní, aj pri podávaní zmesi IR/LF existuje terapeutické okno, v rámci ktorého sa významná časť cytotoxických účinkov manifestuje proti rakovinovým bunkám, zatiaľ čo normálne bunky zostávajú ovplyvnené v menšom rozsahu, čo poukazuje na (a ďalej dokladuje) rakovinovo-špecifické pôsobenie IR a LF.
Obrázok 2: Cytotoxické účinky podávania zmesi IR/LF v bunkách adenokarcinómu prsníka (A) a epitelových bunkách prsníka (B).
Zmes IR/LF zosilňuje cytotoxické účinky paklitaxelu, ktoré sú značne špecifické pre nádorové bunky
Ďalej sme skúmali kombinované cytotoxické účinky paklitaxelu (PTX) a zmesi IR/LF v bunkách duktálneho adenokarcinómu prsníka a prsníkového epitelu. V týchto experimentoch sme tiež porovnávali cytotoxické účinky PTX s účinkami zmesi IR/LF. Najprv sme určili koncentráciu PTX, ktorá sprostredkováva 50 % jej cytotoxického účinku (polovica maximálnej účinnej koncentrácie; EC50) v oboch bunkových líniách (obr. 3). Túto koncentráciu PTX sme potom použili v ďalších experimentoch porovnávajúcich cytotoxické účinky PTX s účinkami zmesi IR/LF.
Obrázok 3: Cytotoxické účinky PTX v bunkách adenokarcinómu prsníka (A) a epitelových bunkách prsníka (B).
Zistili sme, že podávanie zmesi IR/LF môže sprostredkovať dokonca vyššie cytotoxické účinky ako PTX (obr. 4), čo naznačuje, že správne nastavené podávanie zmesi IR/LF môže inhibovať rast nádorových buniek rovnako efektívne ako rutinne používané chemoterapeutiká. Keďže je možné dosiahnuť rovnaké terapeutické účinky chemoterapeutikami a zmesou IR/LF, možno hypoteticky pripustiť použitie zmesi IR/LF na boj proti rakovine bez potreby použitia chemoterapeutík. Tiež sme zistili, že zmes IR/LF značne posilňuje cytotoxické účinky PTX, čo naznačuje, že súčasné podávanie zmesi IR/LF a chemoterapeutík môže viesť k zníženiu koncentrácie chemoterapeutík bez ovplyvnenia výsledných terapeutických účinkov. Najdôležitejšie je, že posilňujúce účinky zmesi IR/LF na cytotoxicitu PTX sú prakticky nezávislé od jej dávky, aspoň v rozsahu dávok, ktoré sme my študovali. Všetky vyššie uvedené fakty opäť jasne ukazujú, že pozorované účinky sú vysoko špecifické pre nádorové bunky, pretože v normálnych epitelových bunkách prsníka sú podstatne znížené.
Obrázok 4: Podávanie zmesi IR/LF posilňuje cytotoxické účinky PTX v bunkách adenokarcinómu prsníka (A) a epitelových bunkách prsníka (B).
Názov štúdie: Testovanie terapeutickej účinnosti prírodných látok s imunomodulačným účinkom na modeli karcinómu prsníka
Cieľ: Overiť protinádorový/terapeutický účinok preparátov značky Immuno-Recover a Life-Force na modeli subkutánnych alograftov triple-negatívneho karcinómu prsníka.
Prehľad štúdie
Abstrakt
Triple-negatívny karcinóm prsíka (TNBC) predstavuje vysoko agresívny nádor s obmedzenými možnosťami liečby. Štúdia testovala terapeutický účinok prírodných preparátov Immuno-Recover (IR) a Life-Force (LF) na modeli subkutánnych alograftov bunkovej línie 4T1, samostatne alebo v kombinácii s chemoterapeutikom Paclitaxel (PTX). Kombinácia IR a PTX preukázala zlepšenie infiltrácie nádorov lymfocytmi a zníženie frekvencie metastáz. Článok zhŕňa kľúčové zistenia a navrhuje smery pre ďalší výskum.
Úvod
Triple-negatívny karcinóm prsíka je charakterizovaný absenciou hormonálnych receptorov a nadmernej expresie HER2, čo značne obmedzuje jeho liečbu. Hoci chemoterapia zostáva hlavným terapeutickým prístupom, úlohu imunoterapie čoraz viac zdôrazňujú štúdie preukazujúce jej účinnosť. Cieľom tejto štúdie bolo overiť účinok prírodných preparátov IR a LF na podporu protinádorovej imunity.
Materiály a metódy
Experimentálny model
Bunky 4T1 (syngénny model subkutánnych alograftov) boli implantované do myší BALB/c. Bunky boli geneticky modifikované na expresiu luciferázy, čo umožnilo sledovanie metastáz pomocou PCR.
Liečba a experimentálne skupiny
IR a LF boli podávané denne v monoterapii alebo v kombinácii s PTX.
Kombinácie boli testované na inhibíciu rastu nádorov a redukciu metastáz.
Hodnotenie
Rast nádorov bol sledovaný volumetricky.
Lymfocyty v nádoroch boli detegované imunohistochemicky (marker CD45).
Metastázy boli detegované pomocou PCR v odobratých orgánoch.
Výsledky
Rast nádorov
Štúdia nepreukázala signifikantný vplyv IR alebo LF na redukciu rastu nádorov. Kombinácia IR a PTX nepreukázala jednoznačný efekt na rast alograftov, ale zlepšila imunologické ukazovatele.
Infiltrácia lymfocytmi
Imunohistochemické vyšetrenia preukázali zlepšenie infiltrácie nádorov lymfocytmi, najvýraznejšie v skupine IR+PTX, kde bola infiltrácia signifikantne výraznejšia (p < 0,05).
Obrázok Infiltrácia subkutánnych alograftov lymfocytmi. (A) všetky liečené skupiny vykazovali vyššiu infiltráciu lymfocytmi v porovnaní s neliečenou kontrolu, štatisticky signifikantné bolo zvýšenie u skupiny liečenej kombináciou IR+PTX; hodnoty predstavujú priemer ±SD, * p ˃ 0,05
Metastatický rozsev
PCR analýzy ukázali najnižšiu frekvenciu metastáz (17 %) v skupine IR+LF+PTX. Samotný PTX bol toxický, čo viedlo k úhynu všetkých myší v tejto skupine.
Záver
Štúdia preukázala potenciál kombinácie IR a PTX na zlepšenie protinádorovej imunity a redukciu metastáz. Tieto zistenia podporujú ďalší výskum zameraný na imunomodulačné vlastnosti prírodných preparátov. Štúdia bola realizovaná v spolupráci s Biomedicínskym centrom Slovenskej akadémie vied (BMC SAV).